質粒小量提取試劑盒在使用過程中可能會遇到一些常見故障，以下是一些常見故障及相應的解決方法：

　　一、細菌沉積在管底，難以懸浮

　　現(xiàn)象描述：

　　在離心后，細菌沉積在管底，難以通過旋渦振蕩充分懸浮。

　　解決方法：

　　1.如果要收集超過一定量（如5ml）的細菌培養(yǎng)物，離心后可能難以懸浮，此時可嘗試用移液器吸頭吹打菌體沉淀，以懸浮細菌。

　　2.可以考慮降低離心速度，延長離心時間，例如改為3000rpm離心5分鐘收集菌體。

　　二、溶液過于粘稠或未呈現(xiàn)預期狀態(tài)

　　現(xiàn)象描述：

　　1.加入Buffer II后，溶液變得非常粘稠，無法流動。

　　2.加入Buffer II后，溶液未呈現(xiàn)粘稠的半透明狀，而是維持細菌在Buffer I中的渾濁狀，無粘滯感。

　　解決方法：

　　1.對于第一種情況，通常是因為細菌用量過多，請適當減少細菌用量。

　　2.對于第二種情況，可能是細菌培養(yǎng)物中污染有大量的真菌，或者革蘭氏陽性細菌等不能被Buffer II所溶解的微生物。應確保從新鮮制備的含抗生素的平板中挑取單克隆菌落接種培養(yǎng)，而非用甘油菌接種。
 

　　三、沉淀不能沉積到管底

　　現(xiàn)象描述：

　　離心后沉淀不能沉積到管底，呈膨脹物的形式懸浮在液體中。

　　解決方法：

　　這通常是由于加入Buffer N8（或類似試劑）后未充分中和所致。請翻轉離心管若干次（如10次）后再次離心。

　　四、質粒DNA上樣電泳異常

　　現(xiàn)象描述：

　　質粒DNA上樣電泳時，加入上樣孔的DNA溶液不能下沉，而是上浮飄散開來。

　　解決方法：

　　這通常是因為高速空離步驟沒有操作，導致洗脫的質粒中乙醇含量過多。在洗脫后應確保進行高速空離步驟，以去除殘留的乙醇。

　　五、其他常見問題及解決方法

　　1.質粒得率較低：

　　大腸桿菌老化：涂布平板培養(yǎng)后，重新挑選新菌落進行液體培養(yǎng)。

　　質粒拷貝數低：由于使用低拷貝數載體引起的質粒DNA提取量低，可更換具有相同功能的高拷貝數載體。

　　菌體中無質粒：有些質粒本身不能在某些菌種中穩(wěn)定存在，經多次轉接后有可能造成質粒丟失。例如，柯斯質粒在大腸桿菌中長期保存不穩(wěn)定，因此不要頻繁轉接，每次接種時應接種單菌落。

　　堿裂解不充分：使用過多菌體培養(yǎng)液會導致菌體裂解不充分，可減少菌體用量或增加溶液的用量。

　　溶液使用不當：如溶液2和3在溫度較低時可能出現(xiàn)渾濁，應置于適當溫度（如37℃或42℃）保溫片刻直至溶解為清亮的溶液后再使用。

　　吸附柱過載：不同產品中吸附柱吸附能力不同，如果需要提取的質粒量很大，請分多次提取。

　　質粒未全部溶解（尤其質粒較大時）：洗脫溶解質粒時，可適當加溫或延長溶解時間。

　　洗脫體積太小或洗脫時間過短：隨著洗脫體積的增大回收率增高，但產品濃度降低。為了得到較高的回收率可以增大洗脫體積；洗脫時間對回收率也會有一定影響，洗脫時放置一段時間（如1分鐘）可達到較好的效果。

　　2.細菌離心加入溶液I后菌體狀態(tài)異常：

　　菌體呈絮狀不均勻或呈細砂狀：可能是細菌發(fā)生溶菌，可減少培養(yǎng)時間或者試試平板培養(yǎng)，質粒提取前用PBS將菌落洗下。相較來說，固體培養(yǎng)基上細菌生長的要好一些。

　　菌液不宜生長太濃，搖床速度不宜過高，達到OD600 1.5左右即可。

　　質粒小量提取試劑盒在使用過程中可能會遇到多種常見故障，但大多數問題都可以通過仔細閱讀說明書、規(guī)范操作步驟以及采取適當的解決方法來避免或解決。如果問題依然存在，建議聯(lián)系試劑盒的生產商或相關技術支持團隊尋求幫助。