質粒小量提取試劑盒 高純度質粒試劑盒

產品描述

     本試劑盒采用改進SDS-堿裂解法裂解細胞，離心吸附柱內的硅基質膜在高鹽、低pH值狀態(tài)下選擇性地結合溶液中的質粒DNA，再通過去蛋白液和漂洗液將雜質和其它細菌成分去除，最后低鹽、高pH值的洗脫緩沖液將純凈質粒DNA從硅基質膜上洗脫。

產品特點

1.離心吸附柱內硅基質膜全部采用進口世界公司特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復性好。克服了國產試劑盒膜質量不穩(wěn)定的弊端。

2.去蛋白液配方，可以高效去除殘留的核酸酶，即使是核酸酶含量豐富的菌株如JM系列、HB101也可以輕松去除。有效防止了質粒被核酸酶降解。

3.快速、方便，不需要使用有毒的benfei、氯仿等試劑，也不需要乙醇沉淀。獲得的質粒產量高、純度好， 可以直接用于酶切、轉化、PCR、體外轉錄、測序等各種分子生物學實驗。

運輸和保存方法

1）本試劑盒在室溫儲存12個月不影響使用效果。

2）RNase A保存在即用型甘油緩沖液中，常溫運輸，收到后，不超過25℃室溫至少保存6個月，4℃保存12個月，長期保存放－20℃。

3）使用時，將試劑盒所帶的全部RNase A加入溶液P1后（終濃度100ug/ml）置于2-8℃保存。如果溶液P1中RNase A失活，提取的質粒可能會有微量RNA殘留，在溶液P1中補加RNase A即可。

4）環(huán)境溫度低時溶液P2中SDS可能會析出渾濁或者沉淀，可在37℃水浴加熱幾分鐘，即可恢復澄清，不要劇烈搖晃，以免形成過量的泡沫。

5）避免試劑長時間暴露于空氣中產生揮發(fā)、氧化、pH值變化，各溶液使用后應及時蓋緊蓋子。

質粒小量提取試劑盒 高純度質粒試劑盒

  注意事項

1.所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉速可以達到13,000rpm的傳統(tǒng)臺式離心機，如Eppendorf  5415C 或者類似離心機。

2.提取質粒的量與細菌培養(yǎng)濃度、質粒拷貝數(shù)等因素有關。一般高拷貝質粒，建議接種單菌落于 1.5-4.5 ml加合適抗生素的LB培養(yǎng)基， 過夜培養(yǎng)14-16個小時，可提取出多達20µg的純凈質粒。如果所提質粒為低拷貝質粒或大于10kb的大質粒，應適當加大菌體使用量，使用5-10 ml過夜培養(yǎng)物，同時按比例增加P1、P2、P3的用量，其它步驟相同。

3.得到的質粒DNA可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。OD260值為1相當于大約50μg/ml DNA。電泳可能為單一條帶，也可能為2條或者多條DNA條帶，這主要是不同程度的超螺旋構象質粒泳動位置不一造成，與提取物培養(yǎng)時間長短、提取時操作劇烈程度等有關。本公司產品正常操作情況下基本超螺旋可以超過90%。

4.質粒DNA確切分子大小， 必須酶切線性化后，對比DNA分子量Marker才可以知道。處于環(huán)狀或者超螺旋狀態(tài)的的質粒，泳動位置不確定，無法通過電泳知道其確切大小。

5.洗脫液EB不含有螯合劑EDTA，不影響下游酶切、連接等反應。也可以使用水洗脫，但應該確保pH大于7.5，pH過低影響洗脫效率。用水洗脫質粒應該保存在－20℃。質粒DNA如果需要長期保存，可以用TE緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影響下游酶切反應，使用時可以適當稀釋。

6.本產品僅作科研用途！

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